產品的無菌保證水平是指一個體系經過滅菌操作后達到無菌狀態的概率，要確定一個產品的無菌狀態，必須要符合歐洲標準EN556的條件，EN556規定無菌保證水平為10-6，即每一百萬細菌中有一個存活的概率。

ISO 11137-2-2006中規定了如何確定輻照產品的無菌保證水平。（醫療器械的滅菌，輻照滅菌，第二部分，滅菌劑量的確認）

劑量確認的方法

ISO 11137-2-2006中有兩種方法來確認滅菌劑量使產品達到某一無菌保證水平，分別是方法一和方法二，下面列出了這兩種方法的原理和過程。

方法一

方法二可用來確定：為了達到某一無菌保證水平所需的輻照劑量，在這種方法中，我們需要用到一個反映微生物耐受劑量的標準表格。

第一步：測定初始生物負載

為了做生物負載分析，至少要分別從三批獨立的產品中抽出10個樣品進行檢測。生物負載分析必須按照一個經驗證的、可行的方法進行分析。計算出每一批產品的平均生物負載，用30個樣品的平均生物負載作為三批樣品的總平均生物負載。如果三批產品中有一批的平均生物負載比總平均生物負載大兩倍或兩倍以上，就用此批的平均值來做劑量驗證，否則，用三批的總平均值來做劑量驗證。

第二步：獲得驗證劑量

一旦確定了原始生物負載量，就可以運用ISO 11137-2-2006標準中的參考表格確定達到10-2滅菌水平的劑量，使用該劑量處理100個樣品得出的無菌實驗結果，可以外推出10-6無菌保證水平對應的劑量是否合適。使用該參考表格時，產品中實際平均生物負載量應小于或等于表格中列出的生物負載量。

第三步：進行劑量驗證試驗

用參考表格確認的驗證劑量輻照100個樣品，所用驗證劑量的相對誤差不得超過±10%，然后將輻照后的產品移入無菌實驗室進行無菌檢測，每100個樣品的無菌檢測要獨立進行。樣品于30±2℃培養箱中培養14天， 對陽性結果進行計數。培養的14天內，定期觀察陽性實驗的數目。

第四步：結果解析

如果100個實驗樣品中的陽性數目少于2個，則接受該驗證劑量。

第五步：建立滅菌劑量

通過查閱ISO 11137-2-2006標準中的表5可以確定達到某一無菌保證水平應采用的滅菌劑量。

方法二

方法2是用來確定達到某一特定的無菌保證水平所需的輻照劑量。由于微生物對輻照有耐受性，該劑量確定的過程是復雜的，并且需要一系列的計算工作。下面僅接受一下該過程的大致過程。

第一步：至少從三批獨立產品中分別抽出280份樣品進行分析。

第二步：每20份產品分別作為一個批次用不同的劑量輻照。至少以9個不同的輻照的劑量、

劑量梯度為2kGy(2, 4, 6, 8, ….., 18kGy)輻照以上樣品，并對劑量進行監測。輻照后的產品分別進行無菌測試。

第三步：根據以上無菌試驗的結果，查標準估計達到10-2無菌保證水平所需的劑量。通過第二步無菌試驗的結果決定選擇哪一批產品用來做進一步的無菌試驗。從所選批次中選出100個樣品用查表得出的劑量進行輻照處理，然后做無菌試驗。

第四步：無菌試驗的結果作為計算最低滅菌劑量的依據。

VDmax方法——25kGy或15kGy作為滅菌劑量的證實

ISO 11137-2-2006中也列出了如何對兩種滅菌劑量（25 kGy、15 kGy）進行驗證的方法。

這種方法被稱為VDmax方法，和方法1的操作方法相似，因為該方法也需要進行原始生物負載量測定、劑量驗證和無菌試驗。

第一步：測定初始生物負載

至少從三批產品中抽出10份產品做生物負載分析。生物負載分析必須按照一個經驗證過可行的方法進行分析。計算出每一批產品的生物負載，用30個樣品的平均生物負載作為三批樣品的總平均生物負載量。如果三批產品中有一批的平均生物負載量比總平均生物負載量大兩倍或兩倍以上，就用此批的平均值來做劑量確定，否則，用三批的總平均值來做劑量確定。平均生物負載的最大允許值如下：

VDmax  25kGy  1000cfu/件

VDmax  15kGy  1.5cfu/件

第二步：進行劑量驗證試驗

初始生物負載確定后，則可確認驗證劑量。通過查ISO 11137-2-2006中的表9得出所需驗證劑量。并按驗證劑量對一批產品中的10份樣品進行輻照處理。無菌保證水平為10-2。然后對10份輻照樣品進行無菌試驗。

第三步：結果解析

如果10份樣品中不超過一份樣品顯示陽性，則接受設定的驗證劑量，所選的滅菌劑量被驗證。如果2份樣品顯示陽性，必須做第二次劑量驗證。

第四步：滅菌劑量驗證

從另一批樣品中選出10分樣品用滅菌劑量（VDmax  Dose）進行輻照，對輻照后樣品進行無菌試驗，如果沒有陽性結果出現，則所選滅菌劑量（VDmax  Dose）驗證通過。

日常滅菌劑量審核

日常劑量審核用來反映所建立的滅菌劑量的持續有效性，日常劑量審核是為了反映初始微生物負載對輻照的耐受性。

兩種方法可用來確定日常劑量審核的周期。

選擇3個月審核一次。

執行劑量審核之前對劑量審核的周期的選擇要做合理的說明。

ISO 11137-2-2006中有關于前期滅菌劑量審核結果的標準和產品生物負載的穩定性的標準。最大的滅菌劑量審核周期是12個月。

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